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Échec du traitement par l’utilisation de la ciprofloxacine pour la gonorrhée se corrèle avec la prévalence des souches de Neisseria gonorrhoeae résistantes aux fluoroquinolones au Bangladesh

Bien que la ciprofloxacine soit l’un des médicaments de choix recommandés pour le traitement de la gonorrhée, une résistance in vitro à ce médicament a été observée dans des études de surveillance et des rapports de cas dans de nombreuses régions du monde, y compris au Bangladesh. Par conséquent, une étude prospective sur les professionnelles du sexe à Dhaka, au Bangladesh, a été menée pour examiner la corrélation entre la réponse in vitro de Neisseria gonorrhoeae et les résultats du traitement par la ciprofloxacine. ,% des isolats gonococciques récupérés chez les travailleuses du sexe étaient résistants à la ciprofloxacine, et il y avait une bonne corrélation entre la résistance in vitro et l’échec du traitement. Ces résultats suggèrent que la résistance in vitro à la ciprofloxacine est prédictive d’échec thérapeutique chez les patients atteints de gonorrhée.

Bien que l’incidence de l’infection gonococcique ait fortement diminué chez les individus dans les pays développés au cours de la dernière décennie, la gonorrhée reste l’une des infections sexuellement transmissibles les plus courantes chez les personnes dans les pays en développement et constitue un problème de santé mondial. Organisation mondiale de la santé OMS, il y a environ un million de nouveaux cas de gonorrhée dans le monde chaque année, et on pense que la plupart des cas se produisent dans des régions d’Asie du Sud-Est, y compris au Bangladesh. souvent, une thérapie à dose unique administrée au moment du diagnostic en réponse aux changements dans la susceptibilité gonococcique, dans le CDC des Centers for Disease Control and Prevention; Atlanta préconise l’utilisation de céphalosporines de troisième génération ou de fluoroquinolones comme traitement de première intention pour les cas non compliqués de gonorrhée Depuis lors, la ciprofloxacine fluoroquinolone a été largement utilisée au Bangladesh comme traitement de première intention des infections gonococciques non compliquées et suspectées. Il a récemment été démontré que des résultats de culture positifs pour Neisseria gonorrhoeae étaient observés chez des travailleuses du sexe au Bangladesh. Des études subséquentes sur la sensibilité antimicrobienne des isolats de gonocoques prélevés chez des femelles ont montré que% des isolats étaient résistants à la CMI de la ciprofloxacine, ⩾ μg / mL et que% avaient une sensibilité réduite à la ciprofloxacine CMI, – μg / mL Bien qu’un succès du traitement antimicrobien soit conditionné par un certain nombre de facteurs, une bonne corrélation entre le niveau in vitro la susceptibilité et la guérison microbiologique sont essentielles pour la prédiction du résultat du traitement I Dans la littérature, les cas de N gonorrhoeae résistant aux quinolones proviennent de la surveillance systématique ou de cas sporadiques De plus, les critères NCCLS et CDC pour la résistance aux quinolones chez les N gonorrhoeae ne sont pas basés sur des données cliniques. Des études rétrospectives ont également suggéré que la corrélation entre l’échec du traitement et la sensibilité in vitro n’était pas cohérente avec l’azithromycine, la ciprofloxacine et l’ofloxacine , car un échec du traitement était observé chez les patients Nous avons donc mené une étude prospective pour évaluer la corrélation entre la réponse in vitro à la ciprofloxacine et les résultats du traitement par celle-ci chez les TSF du Bangladesh qui avaient des cas non compliqués de gonorrhée.

Sujets, matériaux et méthodes

de l’étude si elles étaient enceintes, allaitaient, avaient des maladies systémiques concomitantes, ou avaient reçu un traitement antimicrobien au cours des semaines précédentes Les participants ont été informés de l’étude, et un consentement écrit a été obtenu Une femme médecin a effectué un examen l’utilisation d’un spéculum, et un écouvillon endocervical a été prélevé pour la culture de N gonorrhoeaeAprès avoir diagnostiqué la gonorrhée sur la base des résultats de culture, les FSW ont été traitées avec une seule dose de mg de ciprofloxacine FSWs administrée par voie orale et présentant des symptômes d’infections sexuellement transmissibles. Après les jours suivants, un deuxième prélèvement endocervical sur écouvillon a été recueilli auprès de tous les TQF ayant obtenu des résultats de culture positifs et qui sont restés en réadaptation. résultats, mais de qui un deuxième échantillon endocervical écouvillon ne pouvait pas être col Les échantillons ont été considérés comme guéris définis comme «succès du traitement» si le deuxième échantillon endocervical sur écouvillon était négatif pour N gonorrhoeae. Si l’échantillon endocervical sur écouvillon restait positif à la culture, le sujet était considéré comme ayant eu un échec thérapeutique. Les sujets sont restés dans le centre de rééducation et, à la suite d’une surveillance étroite, n’ont pas eu de contact sexuel pour réinfection. Le manque de contact sexuel entre le moment de la thérapie et la performance post-thérapeutique de la culture a été confirmé par Les patients infectés par un isolat résistant à la ciprofloxacine ont été traités par injection unique de mg de ceftriaxone, et tous les patients présentant une gonorrhée positive à la culture ont ensuite été traités pour une infection à Chlamydia, comme recommandé par l’OMS . N gonorrhoeae Un échantillon d’écouvillon endocervical a été strié sur de la gélose Thayer-Martin modifiée BBL Mic systèmes de robiologie N gonorrhoeae a été identifié sur la base des résultats morphologiques des colonies; Coloration de Gram; Les tests d’oxydation oxydase, catalase et sucre ont également été confirmés au moyen d’une analyse PCR réalisée avec l’utilisation d’amorces qui amplifient une région bp du plasmide cryptique gonococcique. Les isolats ont été conservés à – ° C dans du bouillon trypticase soja avec% glycérol, pour une étude plus approfondie Les CMI de la pénicilline, de la tétracycline, de la ciprofloxacine, de l’ofloxacine, de la norfloxacine, de la ceftriaxone et de la spectinomycine ont été déterminées au moyen d’une dilution en gélose, comme décrit ailleurs. : pénicilline, – μg / mL; tétracycline, – μg / mL; ciprofloxacine, – μg / mL; ofloxacine, – μg / mL; norfloxacine, – μg / mL; ceftriaxone, – μg / mL; et spectinomycine, – μg / mL Les agents antimicrobiens dilués ont été incorporés dans la base de gélose GC Becton Dickinson complétée avec% Isovitalex Becton Dickinson Des plaques ont été inoculées avec des cfus de bactéries et ont été incubées en% CO pour les souches de référence gonorrhoeae. Les tests ont été réalisés à plusieurs reprises et la valeur moyenne des résultats a été obtenue. Le point final a été défini comme la concentration la plus faible d’un agent antimicrobien qui inhibait complètement la croissance. La sensibilité aux antimicrobiens était jugés selon les critères de point de cassure MIC définis par le test NCCLS β-lactamase Tous les isolats ont été testés pour la production de β-lactamase au moyen d’une méthode acidimétrique papier, comme décrit ailleurs Analyse sérogroupe et sérovar Les sérogroupes des isolats ont été déterminés par utilisation d’un kit de test de coagglutination Phadebact GC monoclonal; Boule Diagnostics AB fait selon les instructions du fabricant Le sérovar de chaque isolat a également été déterminé au moyen d’une méthode de coagglutination, en utilisant un panel d’anticorps monoclonaux contre la protéine I. Boule Diagnostics ABPCR-polymorphisme des fragments de restriction des isolats ADN chromosomique extrait à partir de cultures d’isolats d’une nuit, comme décrit ailleurs Le gène por des isolats a été amplifié par analyse PCR réalisée avec l’utilisation d’amorces spécifiques de la région conservée du gène. Les amorces utilisées étaient POR ATG AAA AAA TCC CTG ATT GCC C L’amplification du gène por consistait en des cycles de min à ° C, de min à ° C et de min à ° C. Une étape initiale et une étape finale de min à ° C et min à Les produits amplifiés ont été analysés au moyen d’une électrophorèse sur gel d’agarose en%. Le produit amplifié était – kb pour les isolats exprimant la protéine I / A PIA, comparé à un produit amplifié. de kb pour les isolats exprimant la protéine I / B PIB Quinze microlitres du produit de PCR ont été digérés avec l’enzyme de restriction Msp AI Promega et ont été analysés sur gel de polyacrylamide non dénaturant. Les bandes ont été analysées après coloration au bromure d’éthidium

Résultats

Prévalence de la gonorrhée et échec du traitement Un total de TQF a été inclus dans l’étude. Parmi ces TQF,% avaient des résultats de culture positifs pour la gonorrhée et ont reçu un traitement par ciprofloxacine. Un deuxième échantillon endocervical a été prélevé chez les TQF; Le deuxième échantillon a été testé positif pour la gonorrhée en% de ces TSF. Sensibilité aux antimicrobiens par dilution en gélose Les susceptibilités antimicrobiennes des isolats des deux groupes de patients avec échec thérapeutique et ceux avec le succès du traitement est montré dans la figure A total de%,% et% des isolats dans le groupe de patients avec succès du traitement avaient la sensibilité à la ciprofloxacine, l’ofloxacine, et la norfloxacine, respectivement, et% de,% de, et% D’autre part,% des isolats de patients présentant un échec thérapeutique étaient résistants à la ciprofloxacine, à l’ofloxacine et à la norfloxacine, et le% d’entre eux avaient une sensibilité réduite à tous ces isolats. drogue figure B; P & lt; Un total de% et de% des isolats provenant des patients qui avaient un échec thérapeutique étaient résistants à la pénicilline et à la tétracycline, comparés au% et au% des isolats, respectivement, des patients qui avaient un traitement réussi de l’infection P & gt; La répartition des CMI de la ciprofloxacine pour les isolats des deux groupes de patients est indiquée dans la figure. Pour le% des isolats de patients ayant eu un succès thérapeutique, les CMI étaient de – μg / mL D’autre part, pour% des isolats de patients échec du traitement, les CMI étaient de – μg / mL Presque tous les isolats des deux groupes étaient sensibles à la ceftriaxone et à la spectinomycine

Figure View largeTélécharger la sensibilité aux antibiotiques des souches de Neisseria gonorrhoeae isolées des professionnelles du sexe qui ont répondu au traitement par la ciprofloxacine, mg A, et de celles n’ayant pas répondu au traitement B, déterminée par l’utilisation de la méthode de dilution en gélose. La sensibilité aux antibiotiques des souches de Neisseria gonorrhoeae isolées des professionnelles du sexe qui ont répondu au traitement par la ciprofloxacine, mg A, et de celles qui n’ont pas répondu au traitement B , tel que déterminé par l’utilisation de la méthode de dilution sur gélose. Les souches blanches sensibles, les souches moyennement sensibles ou les souches présentant des barres hachurées à sensibilité réduite, et les souches résistantes barres noires sont montrées

Figure Vue largeDownload slideDistribution des CMI de la ciprofloxacine pour les isolats de Neisseria gonorrhoeae chez les patients ayant obtenu un traitement succès barres blanches ou barres noires de rupture Les critères de rupture utilisés pour l’évaluation des isolats étaient ceux recommandés ailleurs Figure Vue largeTélécharger des CMI de ciprofloxacine pour Neisseria gonorrhoeae Les critères de rupture utilisés pour l’évaluation des isolats étaient ceux recommandés ailleurs Les susceptibilités antimicrobiennes des isolats de prétraitement et de post-traitement des patients ayant eu un échec thérapeutique ont été comparées. et les isolats de post-traitement se sont avérés être des N-gonorrhoeae productrices de pénicillinase similaires aux isolats, dont% étaient des N-gonorrhoeae productrices de pénicillinase; Analyse sérogroupe et sérovar Pour déterminer la relation clonale entre les isolats, et pour confirmer que l’échec du traitement était dû à la résistance des isolats primaires à la ciprofloxacine, plutôt Pour tous les isolats, des sérogroupes et des sérovars ont été analysés. Tous les isolats appariés se sont révélés être de sérogroupe et de sérovar identiques, déterminés par une méthode de coagglutination utilisant un panel d’anticorps monoclonaux contre la protéine I Des isolats appariés de patients qui ont eu un échec du traitement,% appartenaient au sérogroupe A et% appartenaient au sérogroupe B. Parmi les isolats de patients ayant eu un succès thérapeutique,% appartenaient au sérogroupe A et% appartenaient au sérogroupe B Tous les isolats, des deux groupes de patients, qui exprimaient PIA appartenait au sérovar Arst Serovar Bypts était le sérovar le plus commun, survenant en% des isolats des deux patients L’analyse de polymorphisme des fragments de restriction de longueur de fragments de PCR a montré que l’échec du traitement était dû à la résistance des isolats primaires à la ciprofloxacine, plutôt qu’à la réinfection avec des isolats résistants du même sérovar, le gène por a été amplifié à partir de chaque paire d’isolats de la PCR et a été clivé avec l’enzyme de restriction Msp AI. Tous les isolats appariés se sont révélés identiques et hébergeant des PIA ou des PIB, et ils présentaient des schémas de digestion identiques.

Figure Vue largeDownload slideA, les gènes por amplifiés par PCR d’isolats appariés de Neisseria gonorrhoeae qui ont été recueillies avant et après le traitement, après la séparation sur% gel d’agarose et coloration au bromure d’éthidium ont été réalisés amplificateurs POR et POR amplifié un amplicon – kb pour la por gène qui exprimait la protéine I / A PIA et un amplicon-kb pour le gène por qui exprimait les protéines L / I PIB Lanes,,, et désignaient des isolats de prétraitement,,, et, respectivement, Lanes,,, et désignaient des isolats post-traitement de les patients correspondants Lane M, un marqueur de poids moléculaire φx ADN / HaeIII fragment B, des profils de polymorphisme de longueur de fragment de restriction de Msp AI digéré, gènes amplifiés par PCR pré et post-traitement N gonorrhoeae isolats Lanes,,, et indiquent prétraitement isolats,,, et, respectivement, Lanes,,, et indiquent des isolats post-traitement des patients correspondants Lane M, un ADN-marqueur de poids moléculaire -bp ladderFigure View largeDownload slideA, amplifié par PCR Les amorces POR et POR ont amplifié un amplicon -kb pour le gène por qui a exprimé la protéine I / A PIA et un amplicon -kb pour le gène por qui exprime les LIP PIB des protéines I / B,,, et désignent les isolats de prétraitement,,, et, respectivement, Lanes,,, et dénotent des isolats post-traitement des patients correspondants Lane M, molécule moléculaire. marqueur poids-poids φx ADN / fragment HaeIII B, profils de polymorphisme de la longueur des fragments de restriction des gènes por amplifiés par PCR Msp digérés par IA provenant d’isolats de N gonorrhoeae pré- et post-traitement Lanes,,, et indiquent des isolats de prétraitement,, et ,,, et indiquent des isolats de post-traitement des patients correspondants Lane M, une échelle d’ADN de poids moléculaire-marqueur-bp

Discussion

et le CDC pour le traitement de la gonorrhée non compliquée La ciprofloxacine a été largement utilisée au Bangladesh parce qu’elle est relativement peu coûteuse et efficace et qu’une seule dose administrée par voie orale est nécessaire. Dans une étude rétrospective récente, succès du traitement par la ciprofloxacine pour les isolats résistants. pour les isolats à susceptibilité réduite, on a trouvé des% et des%, respectivement; cependant, un échec du traitement a également été rapporté chez des patients infectés par des isolats présentant une sensibilité réduite à la ciprofloxacine Ces résultats peuvent suggérer que la sensibilité in vitro à la ciprofloxacine n’est pas bien corrélée avec les résultats du traitement Dans notre étude prospective, traitement par mg de ciprofloxacine a échoué chez plus d’un tiers des patients, et dans% de ces cas, l’isolat s’est révélé résistant à la ciprofloxacine, à l’ofloxacine et à la norfloxacine. D’autre part,% des isolats de patients ayant répondu au traitement étaient sensibles à la ciprofloxacine Il existe donc une bonne corrélation entre les résultats du traitement et la sensibilité in vitro à la ciprofloxacine. Cependant, parmi les isolats présentant une sensibilité réduite à la CMI, μg / mL, le succès du traitement a été observé dans% des cas avec un CMI de μg / mL, et l’échec du traitement a été observé dans% des cas avec une CMI de μg / mL. Un résultat similaire a été rapporté L’un des principaux problèmes associés à l’utilisation des études prospectives pour déterminer la corrélation entre la sensibilité in vitro et la guérison microbiologique chez les TQF avec gonorrhée est que les sujets sont souvent réinfestés dans la présente étude n’ont pas eu l’occasion d’être réinfectés ; ils étaient dans un centre de réadaptation et n’étaient plus impliqués dans le commerce du sexe Tous les isolats appariés de cette étude présentaient des schémas identiques de sérogroupe, de sérovar et de digestion par des enzymes de restriction, ce qui indiquait la présence d’infections persistantes seulement. Il est intéressant de noter que, dans notre étude précédente,% des isolats gonococciques étaient résistants, et% avaient une sensibilité réduite à la ciprofloxacine Cependant, dans la présente étude,% des isolats étaient résistants et% La résistance à la ciprofloxacine est médiée par les chromosomes, affecte tous les membres du groupe des fluoroquinolones et semble être incrémentale. à la suite d’une mutation ponctuelle dans le gène ADN gyrase gyrA et la topoisomérase IV parC Le nombre important de FSW n’ayant pas répondu au traitement par ciprofloxacine% dans notre étude suggère que les TSF au Bangladesh sont exposées à la ciprofloxacine et que la résistance pourrait se développer sous pression antimicrobienne sélective. Cependant, la possibilité d’introduction de souches résistantes à partir de Parmi les isolats provenant de patients présentant un échec thérapeutique dans la présente étude,% présentaient une résistance chromosomique à la pénicilline, à la tétracycline ou aux deux, ce qui indique que les souches résistantes à la ciprofloxacine sont plus fréquentes chez les isolats ayant une résistance chromosomique à la pénicilline. D’autre part, des isolats provenant de patients traités avec succès étaient des N gonorrhoeae produisant de la pénicillinase, contre% des isolats provenant de patients traités avec succès. patients qui ont eu un échec thérapeutique L’apparition fréquente de CIP levé de ciprofloxacine dans les souches avec une résistance chromosomique à la pénicilline et la tétracycline reste inexpliquée, car le mécanisme de résistance à la ciprofloxacine est différent des mécanismes de résistance à la pénicilline et la tétracyclineIl est important que la pertinence clinique de la résistance in vitro aux agents antimicrobiens qui sont Cette étude prospective a montré que les tests de sensibilité aux antimicrobiens sont utiles pour choisir un agent antimicrobien et prédire les résultats du traitement chez les patients atteints de gonorrhée. Par conséquent, les tests de sensibilité à la ciprofloxacine in vitro ont une bonne valeur prédictive pour l’issue de la gonorrhée. Dans notre étude, notre étude a montré une résistance croissante des isolats de N gonorrhoeae à la ciprofloxacine dans la ville de Dhaka. Par conséquent, la situation devrait être surveillée et des médicaments alternatifs appropriés devraient être envisagés pour le traitement de la gonorrhée. qui ont été testés ont démontré des taux élevés de susceptibilité à la cephalosporine ceftriaxone à large spectre et à la spectinomycine, avec des taux de sensibilité de% et de%, Par conséquent, la ceftriaxone et la spectinomycine devraient être les médicaments alternatifs de choix pour le traitement de la gonorrhée.

Remerciements

Nous remercions Concern Bangladesh pour sa coopération dans la collecte d’échantillons; Aklima Begum et Nargis Akther, pour leur aide; JW Hôpital Tapsall Prince of Wales, Sidney, Australie, pour nous avoir fourni des souches de référence de l’OMS pour la gonorrhée; et Josef Bogaerts et V I Mathan, pour leur examen attentif de cet article